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当前位置:教育论文中心欢乐生肖--硕士论文--帕金森病蛋白ATP13A2作用的分子机制研究
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帕金森病蛋白ATP13A2作用的分子机制研究
 
     论文目录
 
致谢第5-6页
摘要第6-7页
Abstract第7页
缩略词表第8-13页
1.引言第13-23页
    1.1 研究背景与研究现状第13-21页
        1.1.1 帕金森病第13-14页
        1.1.2 ATP13A第14-19页
            1.1.2.1 ATP13A2 基因突变与帕金森病第14-15页
            1.1.2.2 ATP13A2 蛋白的结构与功能第15-19页
            1.1.2.3 ATP13A2 与脂质转运第19页
        1.1.3 鞘磷脂第19-20页
            1.1.3.1 SM的结构和功能第19-20页
            1.1.3.2 SM与 PD第20页
        1.1.4 自噬第20-21页
            1.1.4.1 自噬的定义第20-21页
            1.1.4.2 ATP13A2 与自噬第21页
    1.2 研究目的与研究意义第21-23页
        1.2.1 研究目的第21页
        1.2.2 研究意义第21-23页
2.材料与方法第23-38页
    2.1 实验动物,试剂与仪器第23-27页
        2.1.1 实验动物第23页
        2.1.2 实验试剂第23-25页
        2.1.3 实验仪器与耗材第25-27页
    2.2 实验方法第27-38页
        2.2.1 细胞培养第27-30页
            2.2.1.1 Hela细胞复苏、传代和冻存第27页
            2.2.1.2 MEF细胞的获取、传代与冻存第27-28页
            2.2.1.3 shRNA慢病毒转染第28-29页
            2.2.1.4 Hela细胞稳定株的建立第29页
            2.2.1.5 细胞siRNA转染第29-30页
        2.2.2 基因水平分析鉴定ATP13A2 的表达第30-32页
            2.2.2.1 细胞RNA提取(Trizol经典法)第30-31页
            2.2.2.2 逆转录第31-32页
            2.2.2.3 实时荧光定量PCR(q-PCR)第32页
        2.2.3 蛋白的提取第32-33页
        2.2.4 免疫印迹试验(Western blotting)第33-34页
        2.2.5 点印记(Dot blotting)第34-35页
        2.2.6 免疫荧光第35-36页
        2.2.7 细胞中溶酶体数目的观察第36页
        2.2.8 共聚焦显微镜监测细胞自噬第36-37页
        2.2.9 流式细胞术分析细胞自噬第37页
        2.2.10 数据统计及分析第37-38页
3.结果第38-49页
    3.1 基因与蛋白水平鉴定ATP13A2 的表达第38页
    3.2 ATP13A2与SM的结合检测第38-42页
        3.2.1 Dot blotting技术对ATP13A2 蛋白与不同鞘脂的结合检测第38-39页
        3.2.2 检测不同环境因素对ATP13A2与SM结合的影响第39-40页
            3.2.2.1 pH对 ATP13A2与SM结合的影响第39-40页
            3.2.2.2 金属离子对ATP13A2 结合SM的影响第40页
            3.2.2.3 游离SM、Sph、Cer对 ATP13A2 与膜上SM结合的影响(竞争性抑制)第40页
        3.2.3 干扰ATP13A2 表达对细胞内SM的影响第40-41页
        3.2.4 干扰ATP13A2 表达对细胞内金属离子锰的影响第41-42页
    3.3 干扰ATP13A2 的表达对溶酶体形态数目的影响第42-45页
        3.3.1 共聚焦显微镜监测溶酶体数目的变化第42-45页
        3.3.2 Western blotting检测溶酶体标记蛋白LAMP1 的表达第45页
    3.4 干扰ATP13A2 的表达后对细胞自噬的影响第45-49页
        3.4.1 共聚焦显微镜观察细胞自噬的变化第45-47页
        3.4.2 Western blotting检测细胞自噬LC3 的表达第47页
        3.4.3 流式细胞术监测ATP13A2 降低对细胞自噬流的影响第47-49页
4.结论第49-50页
5.讨论第50-51页
参考文献第51-57页

 
 
论文编号BS4288065,这篇论文共57
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