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无义介导的mRNA降解因子Smg5在小鼠胚胎干细胞中的作用研究
 
     论文目录
 
致谢第5-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-9页
1 引言第12-20页
    1.1 无义介导的mRNA降解(NMD)第12-16页
        1.1.1 简介第12页
        1.1.2 无义介导的mRNA降解(NMD)途径第12-14页
        1.1.3 NMD缺陷与人类疾病第14-15页
        1.1.4 NMD分子的复杂功能第15-16页
    1.2 NMD和胚胎发育第16-18页
        1.2.1 NMD在脊椎动物胚胎发育中不可或缺第16页
        1.2.2 NMD在ESC中功能与作用第16-18页
    1.3 SMG5的研究现状与意义第18-20页
        1.3.1 SMG5研究现状第18-19页
        1.3.2 Smg5研究意义第19-20页
2 材料与方法第20-36页
    2.1 实验动物、试剂及仪器第20-25页
        2.1.1 实验动物第20页
        2.1.2 实验设备第20-21页
        2.1.3 实验试剂第21-23页
        2.1.4 实验试剂配制第23-25页
    2.2 实验方法第25-36页
        2.2.1 小鼠基因型鉴定第25-27页
            2.2.1.1 DNA提取第25页
            2.2.1.2 基因型鉴定方案第25-27页
            2.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳第27页
        2.2.2 胚胎干细胞获取第27-29页
            2.2.2.1 制备滋养层细胞(Feeder Cells)第27-28页
            2.2.2.2 胚胎干细胞获取第28-29页
        2.2.3 稳定表达GFP-Smg5胚胎干细胞系的建立第29页
            2.2.3.1 Smg5全长表达载体构建第29页
            2.2.3.2 Smg5质粒表达稳转系第29页
        2.2.4 RT-PCR检测NMD下游相关含有PTC靶标基因的亚型表达第29-30页
        2.2.5 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)实验第30-31页
            2.2.5.1 蛋白样品的制备第30页
            2.2.5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳第30-31页
        2.2.6 荧光定量PCR检测第31-36页
            2.2.6.1 RNA提取第31-32页
            2.2.6.2 逆转录制备cDNA第32-33页
            2.2.6.3 定量PCR检测第33-36页
3 实验结果第36-50页
    3.1 Smg5条件性敲除小鼠模型建立第36-37页
    3.2 Smg5~(F/F)CreER~(T2+)胚胎干细胞系的建立第37-39页
    3.3 Smg5敲除型小鼠胚胎干细胞系建立第39-47页
        3.3.1 通过4-OHT诱导敲除Smg5~(F/F)CreER~(T2+)ESCs中Smg5基因第39-43页
            3.3.1.1 Smg5~(△/△)胚胎干细胞中NMD因子的代偿性升高第40-41页
            3.3.1.2 Smg5参与ESC中的NMD第41-43页
        3.3.2 pCAG-GFP-Cre瞬时表达建立Smg5~(△/△)小鼠胚胎干细胞系第43-47页
            3.3.2.1 利用pCAG-GFP-Cre敲除Smg5后胚胎干细胞NMD因子变化.第44-46页
            3.3.2.2 GFP-Smg5稳转细胞系的建立第46-47页
    3.4 Smg5与小鼠胚胎干细胞的全能性第47-48页
    3.5 Smg5与小鼠胚胎干细胞的自我更新第48-50页
4 讨论第50-52页
5 结论第52-53页
6 参考文献第53-58页

 
 
论文编号BS4288092,这篇论文共58
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